Долгосрочный эффект трансплантации криоконсервированных клеток фетальной печени крысам

It was studied the therapeutic efficacy and safety of cryopreserved fetal liver cell (FLC) application during long term period after them transplantation to rats with CCl -induced cirrhosis.

FLC were isolated from 8-10 week old human fetuses and cryopreserved. Cirrhosis was induced by small dose injection of CCl₄ during 4 months. FLC (10 mln) were intrasplenically transplanted to cirrhotic rats. Control group received an equivalent volume of medium alone. The observation time after transplantation was 6 months.

It was established, that FLC transplantation stimulated recovery processes and had no any negative effect on rats with experimental cirrhosis at least 6 month after transplantation.


Ранее в нашей лаборатории было установлено, что клетки фетальной печени человека (КФП) положительно воздействуют на организм животных с ССl₄-индуциро-ванным циррозом. Трансплантация клеток фетальной печени снижала смертность крыс, приводила к появлению первых признаков регенерации в патологически измененном органе и частичному восстановлению функциональной активности печени. Время наблюдения ограничивалось двумя неделями, что не позволило оценить обратимость выявленных эффектов, а также безопасность терапии фетальными клетками.

В представленной работе исследовали терапевтическую эффективность и безопасность применения суспензии клеток фетальной печени в течение длительного периода после их трансплантации животным с экспериментальным циррозом.

Клетки для трансплантации выделяли из плодов человека 8-10 недели гестации в соответствии с требованиями биоэтики и криоконсервировали под защитой 10%-го ДМСО. Цирроз печени формировали у крыс путем длительного введения малых доз ССl₄. КФП (10 млн клеток) вводили в селезенку животных со сформированной моделью. Контрольная группа получала эквивалентный объем среды криоконсервирования (ложная трансплантация). Животных выводили из эксперимента декапитацией через 1 и 6 месяцев после трансплантации. Состояние детоксикационной функции печени оценивали по содержанию цитохрома Р-450, аминопирин-N-деметилазной и анилин-гидроксилазной активностям. Гистологическое исследование печени проводили на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. В сыворотке крови определяли ряд биохимических показателей (содержание билирубина, альбумина и активность ЛДГ) через 1, 2, 3 и 6 месяцев после трансплантации.

Результаты работы показали, что через 1 месяц после ложной трансплантации у животных контрольной группы сохранялись все признаки печеночной недостаточности, характерные для цирроза. Выживаемость крыс составила 75%. Введение КФП приводило к увеличению выживаемости животных до 92%, значительному восстановлению уровня цитохрома Р-450 и анилингидроксилазной активности, а также к нормализации аминопирин-N-деметилазной активности. При гистологическом исследовании печени выявлено частичное восстановление структуры органа, а при изучении биохимического профиля сыворотки крови - значительное улучшение показателей. Однако полной нормализации показателей в этот период не происходило. Полученные данные свидетельствовали, что положительное действие клеток фетальной печени сохраняется как минимум до 1 месяца после трансплантации.

Дальнейшее наблюдение за животными показало, что через 6 месяцев после ложной трансплантации полной нормализации структуры печени не происходило, хотя биохимические показатели крови восстанавливались уже через 3 месяца. Трансплантация клеток фетальной печени усиливала восстановительные процессы в организме крыс, что проявлялось в ускоренном приросте массы тела и восстановлении уровня билирубина уже через 2 месяца. Гистологический анализ печени, проведенный через 6 месяцев, не выявил негативного влияния введения клеток фетальной печени.

Результаты работы демонстрируют, что введение клеток фетальной печени приводит к ускорению восстановительных процессов и не оказывает негативного воздействия на организм крыс с экспериментальным циррозом, по крайне мере, в течение 6 месяцев после трансплантации.

Работа выполнена при поддержке гранта Украинского Научно-Технического Центра (проект № 4419).


¹Оченашко О.В., ²Никитченко Ю.В., 1Лебединский А.С., ¹Розанов Л.Ф., ¹Петренко А.Ю.
¹Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, ² НИИ биологии ХНУ им. В.Н. Каразина, г. Харьков, Украина